继乳品之后，鸡蛋和饲料中相继检测出三聚氰胺成分，再度引起社会关注。根据农业部NY/T 1372-2007标准规定，借鉴乳品中检测的高效液相色谱法，天钊特推出针对饲料检测三聚氰胺的成套配置与检测方法，供广大饲料畜牧农场公司以及各相关检测部门与实验院校参考。
检测方法：
1 试验材料与方法
1.1 仪器与试剂
LC100P或EX1600型高效液相色谱仪及紫外检测器，超声波清洗器，PHS-3C型酸度计。
试剂：三聚氰胺，氨水，高氯酸，超纯水
1.2 三聚氰胺标准溶液：准确称取三聚氰胺标准品(99.9%)1.0000g于100mL容量瓶中,加高纯水溶解并定容,制成1000μg/mL的标准贮备液。
1.3 色谱条件
色谱柱: Vensil ASB C18柱,5μm,4.6×250mm;流动相:水:25%氨水=99:1,pH6.5(用高氯酸调节);流速:1.0mL/min;检测波长:215nm;进样量20;柱温:室温。
1.4 样品处理
称取饲料样品0.5g(精确到0.0002g)于100mL容量瓶中,约加70mL高纯水，把容量瓶放到已加热到60℃的超声波清洗器中超声１０分钟，冷却后用水定容到刻度，摇匀。用0.45μm的样品滤头过滤，上机进样20μl。
２结果与讨论
２.1 检测波长与保留时间
经紫外分光光度计的波长扫描，三聚氰胺在
205nm处有最大吸收，但此波长处干扰峰多，所以选215作为检测波长。按上述条件往液相色谱仪中进20μl三聚氰胺标准溶液(10μg/mL)，三聚氰胺的保留时间为7.21min。见图１。
图1 三聚氰胺的保留时间
２.２标准工作曲线的制备
按照试验条件和方法，分别进1.02，2.54，5.09，10.18，20.36，40.76μg/mL的三聚氰胺标准溶液20μl，以三聚氰胺的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，见图2。三聚氰胺的回归方程为Y=5514.31X+10.592，相关系数r=0.9999。三聚氰胺的浓度在1～50μg/mL时有良好的线性关系。
图2 三聚氰胺的标准工作曲线
2.3 精密度试验
移取1.00mL的三聚氰胺标准贮备液(1000μg/mL)于100mL容量瓶中用高纯水定容到刻度，摇匀，制成10μg/mL的三聚氰胺工作液。取工作液20μl进样，连续进6次，三聚氰胺峰面积的RSD(n=6)为0.90%。结果见表1。
表1 精密度试验数据
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 峰面积 | 2074 | 2057 | 2073 | 2063 | 2087 | 2033 |
| RSD% | 0.90 |
2.4 回收率试验
在经本方法测定过的不同的饲料样本中准确加入一定量的三聚氰胺，按同样的操作过程提取、测定，计算回收率。平均回收率为：103.8%。结果见表2。
| 样品名称 | 初始量 μg | 添加量 μg | 测定量 μg | 回收率 % | 平均回收率% |
| 豆粕 | 20.30 | 10.00 | 31.75 | 104.8 | 103.8 |
| 肉粉 | 0.17 | 10.00 | 10.62 | 104.4 |
| 肉骨粉 | 0.00 | 10.00 | 10.22 | 102.2 |
| 味精渣 | 0.13 | 10.00 | 10.52 | 103.8 |
| 鱼粉 | 0.47 | 10.00 | 10.80 | 103.2 |
| 鱼排粉 | 4.14 | 10.00 | 14.76 | 104.4 |
表2 回收率试验数据
2.5 样品的测定
选择有可能添加三聚氰胺的豆粕、鱼粉、鱼排粉、肉粉、肉骨粉和味精渣等饲料样品进行测定(n=3)，重现性好，三聚氰胺与杂质峰完全分离，结果准确。图3为鱼排样品的色谱图。
图3 鱼排样品色谱图
3 结论
3.1 本方法样品处理简单，测定速度快，结果准确可靠。也可用于谷朊粉、小麦蛋白和玉米蛋白粉参入三聚氰胺的检测。
3.2 由于三聚氰胺较难溶于水，因此，在样品处理时一定要在60℃的条件下超声提取
适用范围：适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、植物性蛋白饲料、宠物饲料(干粮和罐头)等
仪器设备配置详单
| 产品名称 | 型号规格 | 描述 | 参考价 |
| 高效液相色谱系统 | LC100P或EX1600 | 含高压输液泵、紫外检测器、进样阀、色谱工作站等 | 面议 |
| 台式高速离心机 | TG16-WS | 最高转速：16000rpm,含10＊5mL离心转子 | 5500.00 |
| 混合器 | XW80A | | 450.00 |
| 超声波清洗器 | KQ-50 | 2L | 3000.00 |
| 氮吹仪 | MTN-2800D | 12孔、24孔、40孔可选 | 4580.00 |
| 固相萃取装置 | ASE系列 | 12路、24路可选 | 3800.00 |
| 高速匀质器 | SGC-400 | 处理量：150~5000mL、速度范围：0~11000rpm | 4100.00 |
| 分析天平 | FC104 | 110g/0.1mg | 6500.00 |
| 液相色谱柱 | Vensil | C18 4.6＊250，5μm或C8 同规格 | 3500.00 |
| 固相萃取柱 | PCX60mg/3ml | 50支/包 | 1200.00 |
| 针头过滤器 | 0.45mm | 有机相，13mm 100个/包 | 220.00 |
| 微孔滤膜 | 0.45mm | 水相，50mm 100片/盒 | 150.00 |
| 三聚氰胺标准品 | 100mg | 99.5% | 200.00 |
| 酸度计 | PHS-3C | | 2398.00 |
| 震荡摇床 | HY-4A | 数字式 | 1380.00 |
| 脂肪抽出器 | | | 自备 |
另购试剂：
| 庚烷磺酸钠 | 20g |
| 柠檬酸 | AR级 500g |
| 三氯乙酸 | AR级 500g |
| 高纯甲醇 | AR级 4升 |
| 高纯已腈 | AR级 4升 |
| 氨水 | 25%-28% |
| 乙酸铅 | |
| 硅烷化试剂 | BSTFA+TMCS,99:1,10mL/pk |
| 主要特点 |
1、网络化，远程化控制和管理
2、智能化、人性化，实现人机对话
3、自动化，实现准无人操作
4、高精度、高稳定性
5、丰富的配置 |
| 检测器 | 技术指标 |
| | 型号 | 1600 UV | 1600 UV II |
| 光源 | 氘灯 | 氘灯+钨灯 |
| 波长范围 | 190~700nm | 190~900nm |
| 波长示值误差 | ≤1nm |
| 波长精确度 | ≤0.1nm |
| 基线噪音 | ±0.2×10-5AU |
| 基线漂移 | 0.3×10-4AU |
| 流通池体积 | 8μL |
| 电源 | 110V/220V |
| 柱温箱 | 技术指标 |
| | 型号 | 1600 CO I | 1600 CO II(带制冷功能) |
| 温度控制范围 | 室温上10℃到 80℃ | 室温下10℃ 到80℃ |
| 温度设置范围 | 4℃~85℃ |
| 控温精度 | 0.1℃ |
| 电源 | 110V/220V |
| 示差检测器 | 技术指标 |
| | 型号 | 1600 RI |
| 折光指数范围 | 1.00-1.75 |
| 流量范围 | |
| 线性范围 | 80×10-5RIU |
| 噪音水平 | 5×10-10RIU |
| 自动零点范围 | 40×10-5RIU |
| 自动零点分辨率 | 5×10-10RIU |
| 流通池体积 | 9μL |
| 流通池压力 | 最大6kg/cm2 |
